关于温育，在ELISA实践测定操作中必定要留意以下几点

（1）要保证在设定的温度下有满意的反应时间。一般来说，加完样本和/或反应试剂后，将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时，孔内温度从室温升至37℃，需求必定的时间，尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下，这段升温时间或许还比较长，而在临床实验室中，很少有人留意这个问题，通常是将微孔板一放入温箱即开端计时，这样就很简略构成实践测定中温育时间不行，弱阳性样本测不出来的问题。曾有一地处南边的血站同行提出了一个问题，就是在每一年的冬天总有那么一个多月的时间，在做HBsAg测定的室内质控中，测定由卫生部临床查验中心供应的1 ng/ml弱阳性样本时，总是测不出来，不知原因为何？这或许就与南边冬天室内温度较低有关，此时微孔板转入温箱后37 ℃温育时间不行，致使弱阳性样本测定为阴性。因此，为保证37 ℃下满意的温育时间，临床实验室可自行确定本实验室不同季节（不同室温下）微孔板从室温拿至温箱后需求多长时间孔内温度才华达到37 ℃，然后恰当延伸板条在温箱中的放置时间。具体的做法是，用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。

（2）温育温度的挑选。在有的ELISA试剂盒的阐明书中，指出温育温度可有两种，例如，一种是37 ℃下1小时，另一种则为43 ℃下45分钟。从免疫测定的抗原抗体反应的实质来看，在较低的温度下反应较长的时间zui为完全。如2～8 ℃下反应24小时。较高的反应温度，因为分子运动的加怜惜，反应时间缩短，这一点对分子含量较多的强阳性样本的测定没有问题，但对分子含量少的弱阳性样本则有漏检的或许。因此，咱们主张在临床ELISA测定中尽量运用较低温育温度较长反应时间的条件。

（3）“边缘效应”的打扫。曾经在运用96孔板的ELISA测定中，常发现有“边缘效应”，即外周孔显色较中心孔深，发生这种“边缘效应”的原因或许为 96孔板周孔与中心孔外表或热力学特征的不同。但有研讨证实在温育中的热力学梯度或许是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体，在实验室的惯例 ELISA测定中，将板从室温（通常在25 ℃左右）置于37 ℃温箱，板也升温时，在外周孔与中心孔之间或许存在一热力学梯度。因此运用水浴或在将反应溶液参加至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度（如37 ℃），就可以很简略地打扫“边缘效应”，而且可进步测定的重复性。

                             

    总而言之，在ELISA测定中，要保证好的测定效果，可选用上述简略方法来保证温育条件，即尽量选用水浴，温育中让微孔板浮于水面上，或将浸透水的沙布放入一大饭盒中成一湿盒，放于温箱中，这样就会因为板条孔底部直接与37 ℃水或湿布的接触，以及水浴箱或湿盒内的高温度，而使反应溶液的温度敏捷与温室平衡。