上皮细胞包括腺上皮细胞，是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分，又由于癌起源于上皮组织，故上皮细胞培养特别受到重视。但上皮细胞培养中常混杂有成纤维细胞，培养时生长速度往往超过上皮细胞，并难以纯化，同时上皮细胞难以在体外长期生存，因此纯化和延长生存时间是培养关键。
体内上皮细胞生长在胶原构成的基膜，因此培养在有胶原的底物上可能利于生长，另外人或小鼠表皮细胞培养在以 3T3细胞为饲养层（用射线照射后）时，细胞易生长并可发生一定程度的分化现象。降低 PH、Ca2+含量和温度，向培养基中加入表皮生长因子，均有利于表皮细胞生长。
以表皮细胞为例，用皮肤表皮和真皮分离培养法可获得纯上皮细胞，其法如下：
1、取材：外科植皮或手术残余皮肤小块，早产流产儿皮肤更好，取角化层薄者，切成 0.5-1平方厘米小块。
2、置 0.02%EDTA中，室温，5分钟。
3、换入 0.25%胰蛋白酶中，4℃过夜。
4、分离：取出皮块，用血管钳或镊子将表皮与真皮层分开。
5、取出表皮，剪成更小的块后，置 0.25%胰酶中，37℃，30—60分钟。
6、反复吹打，制成悬液。
7、培养：用 80目不锈钢纱网滤过后，低速离心，吸去上清。
8、直接加入培养基（Eagle加 20%小牛血清）制成细胞悬液，接种入培养瓶，CO2温箱培养。
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