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如何提高慢病毒对细胞的感染效率?

阅读次数:77    发布时间:2019/7/17 15:30:39

 针对加入慢病毒后,细胞死亡很厉害,该如何处理?
 
这种情况是由于慢病毒对该细胞有一定的毒性作用,需要调整并降低感染的 MOI 值,并且在感染后 4 小时、8 小时、12 小时对细胞进行观察,若发现细胞状态变差时,则需要立刻对细胞进行换液操作,使用新鲜的完全培养液替换病毒感染培养液。
 
如何提高慢病毒对细胞的感染效率?
 
慢病毒对细胞的感染效率受多个因素影响,如细胞自身生长的状态,细胞数量,细胞被慢病毒感染的难易程度等。因此保证细胞正常增殖,轮廓清晰,合适的细胞密度,选择*you的感染条件可以更好的保证感染效率。对于悬浮细胞,可采用离心感染方法,减少病毒感染时的体积,从而提高感染效率。如将细胞培养板密封后,用平角转子离心机 1000 g 离心 1 h,再放回培养箱中正常培养。
那么慢病毒在感染细胞中有什么优良表现呢?
 
慢病毒感染细胞的步骤一般是这个样子的,以「24 孔培养板、贴壁细胞」为例:
 
Day0: 接种细胞
每孔按 5×104 个待感染细胞铺板,用含有 10% FBS 的 DMEM 培养基培养;
 
Day1: 细胞感染
感染前,根据说明书用完全培养基配置感染液,备用吸掉旧培养基,更换为感染液; 并参考细胞 MOI 值,计算病毒使用量,加入病毒进行感染,混匀;
 
Day2 
病毒感染 8~16 h 后,换回常规培养基,继续培养;
 
Day3~4: 确认感染效果
感染 72 h 后,显微镜下观察感染效果,如 EGFP、Cherry 的表达情况;
 
如果都这么简单的话,那你真的是 too young too simple! 
 
那么在慢病毒感染细胞过程中,到底会遇到哪些问题呢?此贴统统帮您搞定~~
 
难感染问题该如何解决?
 
对于一些较难转染的细胞,如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,可以通过添加病毒感染增强液来显著提高转染效率。
 
除了难感染外,感染效率低和加入慢病毒后,细胞死亡也是科研的又一拦路虎。
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