细胞核抗原修复

阅读次数：1212    发布时间：2018/4/27 10:01:41

 细胞核抗原处在细胞的*核心位置，它的修复难度要大于细胞质抗原和细胞膜抗原。几乎所有的的细胞核抗原需要应用高压 120 ℃ 热修复才可以达到理想的效果，使用其他方法都很难见到不错的效果。由于高压热修复的强度要大一些，本身容易脱片，所以我们在实验的时候要做好切片的固定，这个有很多方法可以实现，比如烤片的时间控制、添加一些切片的粘合剂等等，大家结合自己的实验来安排。关于修复液的选择，如果目的抗原真的很难修复，可以选择 pH=8.0 或 9.0 的 EDTA 缓冲液。有文献描述说pH的大小与抗原修复效果成正比，这是因为在加热或者液体中的碱性物质可以引起蛋白质分子之间的曼尼希反应，非常容易破坏蛋白质分子的交联。可专门用来针对那些有难度的细胞核抗原的修复，也就是说 EDTA 缓冲液的修复效果要优于柠檬酸盐缓冲液，国外很多实验室也倾向于应用DTA（pH=8.0 或 9.0）来修复（有时间两种修复液都做一下，加深感受，有助于提升实验技能）。

推荐的方法：高压热修复法

推荐的修复液：柠檬酸盐缓冲液（pH=6.0）或 EDTA（pH=8.0 或 9.0）

实验过程：高压锅加热到喷气开始再加热 2 min（一定要保证里面有充足的修复液，防止干片）后，立即将高压锅端离火源，一定要等蒸汽排放完成以后，再打开锅盖，待缓慢降至室温，用蒸馏水冲洗 2 次，加入 3% H2O28 ~10 min，在用蒸馏水冲洗 2 次，待进入下一步骤。（提示：在实际的修复试验中，我们还要控制好修复时间，时间过长容易导致过修复、组织破坏和非特异性反应增强等不利影响）

含量测定蒙花苷对照品111528-20050420mg
鉴别五味子酯甲对照品111529-20030220mg
含量测定毛蕊花糖苷（麦角甾苷）对照品111530-20050520mg
鉴别毛两面针素对照品111531-20000120mg
鉴别岩白菜素对照品111532-20020250mg
鉴别高三尖杉酯碱对照品111533-20040320mg
含量测定紫杉醇对照品111534-20020220mg
含量测定白藜芦醇对照品111535-20050220mg
鉴别土贝母苷甲对照品111536-20030420mg