流式细胞术(FCM)工作流程中的所有步骤对获取可发表的高品质图像都至关重要。尤其是利用正确的抗体去识别抗原以及放大信号是实现*佳显示的关键。
抗体滴定方法
用同种细胞，相同细胞数量与反应体积，加入不同量的抗体计算阳性峰荧光强度及信噪比(S/N>3)。
1、滴定的浓度范围尽量大，至少5个左右。
2、滴定实验条件要和实际实验条件一致，如反应温度、pH等。
3、弱表达或不分群的抗原不适合做滴定。
FC受体封闭试剂
Fc受体是指细胞表面能够与免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM、IgE和IgD)结合的分子，存在于NK 细胞、肥大细胞、巨噬细胞、中性粒细胞的表面。FcR 能够与抗体的Fc段结合，在检测时产生假阳性
商品化的 Fc Block试剂:重组人 IgG，小鼠 CD16/CD32 抗体。
人血清或相应物种的血清
区分死细胞的方法
死细胞的自发荧光水平很高，且容易摄取抗体导致非特异性结合，*终影响实验结果;还可能会释放DNA，DNA非常粘稠，会导致细胞成团，容易堵塞管路。
死细胞特性：细胞膜渗透性增强，失去膜完整性
DNA结合染料: PI, DAPI, 7-AAD, TO-PRO-3等DNA染料只会进入细胞膜受损的细胞，结合到细胞的DNA上,
蛋白结合染料：结合细胞表面或膜内的游离胺，活细胞弱阳，死细胞强阳。可以用在固定标本中的，区分样本固定细胞状态。
