根据比尔定律, 吸光度与试样浓度成正比, 在不同的吸光度( Absorbance,Abs) 范围内测量, 可引起不同的误差.分析工作者应予高度重视.分析样品浓度太低或浓度太高, 吸光度值超越了合适的范围, 都不会得到满意的结果.应使被分析样品的吸光度范围控制在一个合理的范围内.
试样浓度不能太低, 吸光度不能太小, 信号过小, 光度噪声的影响较大,使
仪器的信噪比下降, 被测试的试样浓度下限增高和分析误差增大, 如测试huang曲霉素, 因仪器的噪声太大, 测试数据从0. 4Ab s 开始就超过1%的相对误差.
西北大学的高老师在操作
elisa试剂盒实验的时候发现了一个问题，于是来电向恒远生物销售人员吴咨询：加完显色液(购买)显色一定时间后，再加终止液（2M H2SO4，自己配制）后，立即测试其吸光度值，等过几分钟再测试吸光度值，发现两次测得的吸光度值发生衰减。第二次均小于次。
并且，加终止液时，从*条加到第12条后，测试发现，吸光度值从1-12条逐级衰减。前提是这12条酶标板都是同一种产品，并且包被相同蛋白。
高老师向吴详细的说明了实验中出现的情况，吴对实验的问题有了一定的了解，随后安排技术人员为高老师沟通，为其解决这一问题，高老师恍悟道：原来ELISA吸光度值衰减这样处理就可以啦。
其实具体的原因也很简单，有可能是显色液的质量不够好。一般情况下，终止反应后OD值的下降前期不是很明显。终止后，吸光度值是会随着时间衰减，所以一般是加完终止液后立即测，这样比较准。
再次分析12条显示逐级递减的原因看看是否是：
① 显色时间调整，如果您现在的显色时间是10MIN，那调整到30MIN，再加终止液,观察上述现象是否出现。
② 终止液中加入少量甘油看下怎么样。
ELISA试剂盒显色时间是30分钟，终止后要求在30分钟内检测，加入终止液后，zui好在加入终止液后2到3分终内检测，这是OD值相对比较高。拟合值能达到四个9。
