重要的渗透型细胞保护剂——二甲基亚砜

阅读次数：723    发布时间：2020/3/4 15:56:57

          二甲基亚砜是一种重要的渗透型细胞保护剂。在深低温(零下200度)保存细胞时冻存过程中，为防止细胞内液冰晶形成、渗透压改变、细胞结构紊乱等导致的损伤，有必要使用含有DMSO冷冻保护剂。DMSO能够快速穿透细胞膜进入细胞中，降低冰点、延缓冻存过程，同时提高细胞内离子浓度，减少细胞内冰晶的形成，从而减少细胞损伤。
        培养细胞时为防止以下问题，细胞将做冷冻保存:、株化细胞产生性状转变(transformation)。第二、污染。第三、株化细胞之增殖或生理特性有特定之限制，只能在一定的代数范围内进行增殖培养或进行特定实验。目前可能解决这些困难的方法其中是细胞冷冻保存法，将冷冻细胞储于冷冻管中，将其中一部分拿出来做一些必要的检查，其它的冷冻细胞则在需要时拿出来解冻，用来进行实验。本方法亦可节省继代培养时所花费的劳力、物力，并可防止培养中经常发生意外事故，丧失细胞珠。因此冷冻保存法为细胞培养研究上之基本技术。 
步骤: 1.准备2 x 107cells/ml的细胞悬浮液。 2.冷冻用培养基(2倍) :以微温水溶解DMSO，在培养基中混合为15% (v/v)。这是DMSO的二倍浓度之溶液。必须在进行实验前在行配制，配好后放在冰箱中，使用量必须和细胞悬浮液的量相等;使用时维持在4℃。 3.分装: 在冷冻管管中分别加0.5ml (1/2冷冻管体积)冷冻用培养基(2倍)及2 x 10(7次方)cells/ml的细胞悬浮液;等量混合。将盖子扭紧后，在管中部贴上胶带密封。 4.记载卷标 : 用抗冻marker pen在冷冻管上写明细胞名称、代数、冷冻的年，月，日等所需要的项目。 5.放进冷却的保利龙容器中，而在- 80℃的超低温槽中放置一个晚上。 6.放进液态氮容器中及保存 : 在支持棒上装上冷冻管，迅速地放进容器内。