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公司新闻

细胞传代的操作过程您了解多少?

阅读次数:664    发布时间:2020/5/7 16:41:20

逐渐发展为试剂的专业制造商和电子商务集成供应商,成为全球试剂职业发展的者。开端细胞传代前,仔细检查细胞传代所需的仪器和试剂是否彻底。
 
一:实验小用具方面:
 
1、小方瓶(100m1)
 
2、克氏瓶
 
3、胶塞
 
4、吸管(10ml、1m1)
 
5、细胞吹打管(20 ml)(以上用具需经121℃至少15 分钟高压灭菌)
 
6、C02 孵箱
 
7、超净台
 
8、倒置显微镜
 
9、4℃、- 20℃冰箱
二:细胞与试剂方面:
 
1、细胞(单层细胞,镜检合适)
 
2、培养液(MEM-0.2%LH 培养液或MEM 培养液或199 等合适细胞有要求的培养液)
 
3、灭活小牛血清、庆大霉素溶液(1 万单位)
 
4、7.5%NaHC03 溶液
 
5、0.25%胰蛋白酶
 
6、 PBS 洗液。
 
 
三:细胞传代的操作过程
 
1、选择细胞:镜检细胞,选择成长状态杰出,细胞界限明晰,具有立体感,形态好无污染、无异常及可疑病变细胞。
 
2、配制细胞培养液:按以下配比配制MEM-0.2%LH 培养液100ml 内,加入灭活小牛血清10m1,庆大霉素溶液0.3m1,7.5%碳酸氢钠溶液3ml。(仅供一般参考)。
 
3、消化细胞:先用PBS 洗液冲洗细胞外表1-2 次,每次10m1,弃去洗液,向细胞瓶内加入0.25%胰蛋白酶溶液,每瓶1m1,细胞瓶平放,使消化液彻底覆盖细胞外表。
 
4、至细胞彻底脱落到胰酶中:每瓶加入10m1 细胞培养液吹打涣散细胞,按所需的传代比例分装于小方瓶(100m1)中,再加入10m1 细胞培养液重复吹打一次后分装,然后补加至所需培养量。
 
5、加塞,置于37±1℃孵箱培养。约2~4 天成片(由细胞接种浓度决定)。
 
6、填写传代记载。
 
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