诱导C57BL/6小鼠骨髓单核细胞条件是什么

阅读次数：645    发布时间：2020/5/25 15:53:31

        小鼠骨髓单核细胞分离自骨髓；骨髓是机体的造血组织，位于身体的许多骨骼内。成年动物的骨髓分两种：红骨髓和黄骨髓。红骨髓能制造红细胞、血小板和各种白细胞。血小板有止血作用，白细胞能杀灭与抑制各种病原体，包括细菌、病毒等；某些淋巴细胞能制造抗体。因此，骨髓不但是造血器官，它还是重要的免疫器官。骨髓是存在于长骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨质间的网眼中，是一种海绵状的组织，能产生血细胞的骨髓略呈红色，称为红骨髓。出生时，红骨髓充满全身骨髓腔，随着年龄增大，脂肪细胞增多，相当部分红骨髓被黄骨髓取代，*后几乎只有扁平骨骨髓腔中有红骨髓。骨髓单核细胞是一种未成熟的单核细胞，在骨髓细胞中约占0.04%，被认为是破骨细胞的前体细胞，较外周血单个核细胞诱导的破骨细胞得率高、全骨髓诱导法产生的破骨细胞数量多，纯度高，较脾细胞诱导法分化效率高。骨髓单核细胞（BMMNCs）是从股骨或胫骨骨髓中分离提取出来的原代细胞，它属干细胞类型。目前，大多数研究用淋巴细胞分离液分离提取骨髓单核细胞，*近也有采用免疫磁珠分离法分离骨髓单核细胞。

     研究诱导C57BL/6小鼠骨髓单核细胞(bone marrow-derived macrophages,BMMs)向破骨细胞分化的条件,提高诱导破骨细胞的效率。方法采用流式细胞仪鉴定BMMs表面标记物,巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colonystimulating factor,M-CSF)与核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factorκB ligand,RANKL)共同诱导BMMs,4天后形成破骨细胞,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)与鬼笔环肽染色鉴定诱导出的破骨细胞,通过骨板吸收实验鉴定破骨细胞的骨吸收活性。结果流式细胞仪检测BMMs的CD11b阳性率为98.4%。经过4天诱导,BMMs激活、融合产生了大量的破骨细胞,呈TRAP阳性,鬼笔环肽染色可见纤维肌动蛋白环形成,骨板上形成大量不规则的骨吸收瘢痕。结论RANKL诱导BMMs 4天可产生骨吸收活性较高的破骨细胞。