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公司新闻

异常汉逊酵母变种培养基的配制

阅读次数:697    发布时间:2020/11/30 16:05:19

异常汉逊酵母变种培养基的配制:
1)、Camp-BAP固体培养基的配制:
 
称取8.92g培养基,溶于200ml蒸馏水中高压灭菌,待冷却至55°C左右加入200ul添加剂A、200ul添加剂B和10ml脱纤维裂解羊血,充分摇匀后倒平板。(添加剂A和B为购买附带)。
 
2)、Skirrow固体培养基的配制:
 
称取8.5g培养基,溶于200ml蒸馏水中高压灭菌,待冷却至55°C左右加入2ml FBP原液和10ml脱纤维裂解羊血,充分摇匀后倒平板。
 
FBP原液配置:
 
分别称取0.5g焦亚硫酸钠、0.5g丙酮酸钠和0.5g硫酸亚铁,溶于20ml蒸馏水中,滤膜过滤除菌,放置4°C冰箱可保存一周。
 
3)、布氏肉汤增菌液的配制:
 
称取28.1g布氏肉汤粉末,溶解于1000ml蒸馏水中高压灭菌,冷却后备用。
 
2、增菌培养
 
宽鳞大孔菌将新鲜食品,如鸡肉,减碎,取5g置于50ml离心管中,加入布氏肉汤至液面覆盖鸡肉样品,拧紧离心管,先在37°C下预增菌4小时,在加入100 ul头孢哌酮(30mg/ml),并颠倒混匀,放置在微需氧培养箱中42°C培养48小时。
 
3、分离纯化
 
用接种环沾取增菌液划线于Skirrow血平板上,在平板上挑取不溶血、灰色、有光泽、且边缘整齐发亮的菌落在Camp-BAP平板上纯化,挑取扁平、灰色、像水滴样菌落多次纯化后保存。
 
4、菌株培养
 
将纯化的弯曲杆菌单菌落接种到Skirrow血平板上,放置在42°C的微需氧环境下培养48小时,观察细菌生长状态。微需氧条件的创造可用微需氧产气袋和密闭培养罐,也可以用微需氧培养箱(三气培养箱)培养。
 
5、菌株保存方法
 
挑取单克隆菌株在Skirrow固体培养基上平板划线,放置在42°C的微需氧环境下培养48小时,用灭菌棉签从平板上刮下长出的菌落,悬浮在50%甘油的布氏肉汤保种液中,置于-80°C超低温保存。在-20°C冰箱中保存效果较差,存放一周后细菌复苏率即显著下降。此外,保存菌株需要每隔一年重新活化保存一次。
 
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