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保存方法:
传代保存法:培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙 [3] 。
液体石蜡覆盖保存法:该法较一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。
悬液保存法:
① 蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。
② 糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。
载体保存法:①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。
常用的冷冻保存法:
① 低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。
② 干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。
③ 液氮保存法(-196℃):是适用范围广的微生物保存法。
产品属性:
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
龟裂链霉菌 | Streptomyces rimosus Sobin et al. | GOY-01J6945 |
基本信息:
培养基综合PDA琼脂(CPDA):马铃薯煮液 1.0L,葡萄糖 20.0g,KH2PO4 3.0g,MgSO4·7H2O 1.5g,维生素B1 微量,琼脂 20.0g,pH 6.0±0.2。121℃,15min灭菌。马铃薯煮液:称取200g去皮的马铃薯块,沸水煮30min,收集滤液定容至1.0L。
传代方法①准备1支含有5~10mL液体培养基的试管和2个平板;②安全柜中打开,用酒精灯灼烧顶部,后迅速滴上无菌水使之破裂,随后用镊子将其敲碎;③吸取0.5mL液体培养基打入冻干管,充分溶解后重新打回液体试管中,混匀;④吸取0.2mL菌悬液打入平板中,涂布均匀,重复两次获得两个平板;⑤将液体试管和平板全部置于上述培养条件下培养,菌种长出即可使用。
生长条件28℃;2-3天;好氧;
存储条件2-8℃
安全等1
形态大小:1-2mm 形状:圆形 边缘:不规则 透明度:不透明 颜色:淡黄色 隆起度:中间凸起 表面:褶皱 质地:干燥
模式菌株no
实验内容:
1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查
2.干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物
3.高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查
4.过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌
菌种的培养:
1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一种)、原种(二种)和栽培种(三种)三。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。
2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。
3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备(见图) 菌种制备 ,其中(1)~(4)为孢子制备过程。
4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。
5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。
放线菌孢子的培养基大多是采用麸皮或豌豆浸出液及无机盐与琼脂制成的。将斜面孢子接入扩大的扁瓶孢子培养基中,于28~37℃培养5~14天。所获得的大量孢子可直接作为种子罐(6)的种子。
6、如果有些生产菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶(5)液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐(7)的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。
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更新时间:2024/5/7 9:16:53
标签:龟裂链霉菌