1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-4738动物细胞镁ATP酶(Mg++ -ATPase)活性比色法定量检测试剂盒M7912620次
shgoy-4739动物组织镁ATP酶(Mg++ -ATPase)活性比色法定量检测试剂盒M7912720次
shgoy-4740细菌镁ATP酶(Mg++ -ATPase)活性比色法定量检测试剂盒M7912820次
shgoy-4741酵母镁ATP酶(Mg++ -ATPase)活性比色法定量检测试剂盒M7912920次
shgoy-4742植物镁ATP酶(Mg++ -ATPase)活性比色法定量检测试剂盒M7913020次
shgoy-4743动物细胞氢/钾ATP酶(H+/K+-ATPase)活性比色法定量检测试剂盒M7913120次
shgoy-4744动物组织氢/钾ATP酶(H+/K+-ATPase)活性比色法定量检测试剂盒M7913220次
shgoy-4745细菌氢/钾ATP酶(H+/K+-ATPase)活性比色法定量检测试剂盒M7913320次
shgoy-4746酵母氢/钾ATP酶(H+/K+-ATPase)活性比色法定量检测试剂盒M7913420次
shgoy-4747植物氢/钾ATP酶(H+/K+-ATPase)活性比色法定量检测试剂盒M7913520次
shgoy-4748动物细胞氢ATP酶(H+-ATPase)活性比色法定量检测试剂盒M7913620次
shgoy-4749动物组织氢ATP酶(H+-ATPase)活性比色法定量检测试剂盒M7913720次
shgoy-4750细菌氢ATP酶(H+-ATPase)活性比色法定量检测试剂盒M7913820次
shgoy-4751酵母氢ATP酶(H+-ATPase)活性比色法定量检测试剂盒M7913920次
shgoy-4752植物氢ATP酶(H+-ATPase)总活性比色法定量检测试剂盒M7914020次
shgoy-4753植物P型氢ATP酶(H+-ATPase)活性比色法定量检测试剂盒M7914120次
shgoy-4754植物V型氢ATP酶(H+-ATPase)活性比色法定量检测试剂盒M7914220次
shgoy-4755植物F型氢ATP酶(H+-ATPase)活性比色法定量检测试剂盒M7914320次
shgoy-4756动物细胞铜ATP酶(Cu++ -ATPase)活性比色法量检测试剂盒M7914420次
shgoy-4757动物组织铜ATP酶(Cu++ -ATPase)活性比色法量检测试剂盒M7914520次
shgoy-4758细菌铜ATP酶(Cu++ -ATPase)活性比色法量检测试剂盒M7914620次
shgoy-4759酵母铜ATP酶(Cu++ -ATPase)活性比色法量检测试剂盒M7914720次
shgoy-4760植物铜ATP酶(Cu++ -ATPase)活性比色法量检测试剂盒M7914820次
Homo sapiens (Human)抗乙酸胆碱受体抗体(Anti-AChR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
重蒸酚100mL包装Homo sapiens (Human)Slit同源物1(Slit1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
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Canis familiaris; Canine (Dog)促甲状腺素(TSH)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
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Rattus norvegicus (Rat)基质Gla蛋白(MGP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
重蒸酚100mL包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。