1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-845石蜡切片细胞色素C氧化酶表达免疫组织化学检测试剂盒M7523310/20次
shgoy-846石蜡切片样品细胞色素C氧化酶表达免疫荧光检测试剂盒M7523410/20次
shgoy-847冰冻切片组织细胞色素C氧化酶表达免疫组织化学检测试剂盒M7523510/20次
shgoy-848冰冻切片组织细胞色素C氧化酶表达免疫荧光检测试剂盒M7523610/20次
shgoy-849细胞样品细胞色素C氧化酶表达免疫组织化学检测试剂盒M7523710/20次
shgoy-850细胞样品细胞色素C氧化酶表达免疫荧光检测试剂盒M7523810/20次
shgoy-851细胞样品细胞色素C氧化酶表达流式细胞仪检测试剂盒M7523910/20次
shgoy-852细胞样品细胞色素C氧化酶表达比色法定量检测试剂盒M7524010/50次
shgoy-853细胞样品细胞色素C氧化酶表达荧光定量检测试剂盒M7524110/50次
shgoy-854 细胞色素C比色法定量检测试剂盒M7524220次
shgoy-855动物细胞/组织细胞色素C释放比色法定量检测试剂盒M7524310次
shgoy-856细胞色素C活力比色法定量检测试剂盒M7524420次
shgoy-857冰冻切片组织细胞色素C蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒M7524510/20次
shgoy-858石蜡切片组织细胞色素C蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒M7524610/20次
shgoy-859 细胞样品细胞色素C蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒M7524710/20次
shgoy-860载玻片细胞样品细胞色素C蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒M7524810/20次
shgoy-861 载玻片细胞样品细胞色素C蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒M7524910/20次
shgoy-862 冰冻切片组织细胞色素C蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒M7525010/20次
shgoy-863 石蜡切片组织细胞色素C蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒M7525110/20次
shgoy-864 细胞样品细胞色素C蛋白表达比色法定量检测试剂盒M7525210/50次
shgoy-865 细胞样品细胞色素C蛋白表达荧光定量检测试剂盒M7525310/50次
shgoy-866 细胞色素C蛋白表达西方杂交分析试剂盒M752545次
shgoy-867细胞色素C蛋白免疫共沉淀分析试剂盒M752555次
Eugenol丁香酚
(E,E)-Germacra-3,7(11),9-trien-6-one吉马酮
D(-)-Amygdalin hydrate苦杏仁苷
硅胶膜离心吸附柱 ( 大提 ) 收集管1只包装3,4-Dihydroxycinnamic acid咖啡酸
thioctic acid硫辛酸
beta-Caroteneβ-胡萝卜素
Astilbin落新妇苷
Luteolin木犀草素
Shikimic acid莽草酸
apigenol芹菜素
Escin, monosodium salt七叶皂苷钠
Oleanic acid齐墩果酸
Xylitol木糖醇
D(-)-Salicin水杨苷
Isosilybin异水飞蓟宾
Silydianin水飞蓟宁
4H-1-Benzopyran-4-one,7-[[2-O-(6-deoxy-伪-L-mannopyranosyl)-尾-D-glucopyranosyl]oxy]-5-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-野漆树苷
Betaine hydrochloride盐酸甜菜碱
Arbutin熊果苷
Synephrine辛弗林
Coumarin香豆素
bergenin monohydrate岩白菜素
Isorhamnetin异鼠李素
Piperine胡椒碱
Nicotinamide烟酰胺
Catalpol梓醇
Phlorizin根皮苷
Hydroxyecdysone蜕皮激素
Olean-12-en-28-oicacid, 3-[(O-6-deoxy-a-L-mannopyranosyl-(1®2)-O-b-D-glucopyranosyl-(1®2)-a-L-arabinopyranosyl)oxy]-, (3b)-竹节香附素A
betulinic acid白桦脂酸
硅胶膜离心吸附柱 ( 大提 ) 收集管1只包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。