1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-118细胞活力台盼蓝染色试剂盒M74506100次
shgoy-119中性红细胞繁殖比色法定量检测试剂盒M74507500次
shgoy-120MTT比色法细胞繁殖测定试剂盒M74508500次
shgoy-121MTS比色法细胞繁殖定量检测试剂盒M74509500次
shgoy-122PICOGREEN细胞繁殖定量检测试剂盒M7451050次
shgoy-123G-B细胞活力和凋亡检测试剂盒M7451150次
shgoy-124ATP生物发光法细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒M7451250次
shgoy-125R-G细胞活力和凋亡检测试剂盒M74513100次
shgoy-126BrdU标记法细胞繁殖流式细胞仪检测试剂盒M7451410/20次
shgoy-127BrdU标记法细胞繁殖荧光显微镜检测试剂盒M7451510/20次
shgoy-128乳酸脱氢酶(LDH)释放法细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒M74516100次
shgoy-129酸性磷酸酶(AP)活力法细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒M74517100次
shgoy-130葡萄糖耗损法细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒M74518500次
shgoy-131红色荧光细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒M74519500次
shgoy-132磺酰罗丹明B(Sulforhodamine B)细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒M74520100次
shgoy-133考马斯亮蓝细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒M74521500次
shgoy-134XTT比色法细胞繁殖测定试剂盒M74522500次
shgoy-135水溶性四氮唑-1 比色法细胞繁殖测定试剂盒M74523500次
shgoy-136水溶性四氮唑-8 比色法细胞繁殖测定试剂盒M74524500次
shgoy-137酚藏花红(PHENOSAFRANINE)植物细胞繁殖测定试剂盒M74525100次
shgoy-138二乙酸荧光素(Fluorescein diacetate)植物细胞繁殖测定试剂盒M74526100次
shgoy-139伊文思蓝(EVANS BLUE)植物细胞繁殖测定试剂盒M74527100次
shgoy-140虫卵细胞活力和死亡荧光定量检测试剂盒M7452850次
shgoy-141虫卵细胞活力和死亡体外裂卵(in vitro excystation)定量检测试剂盒M7452920次
shgoy-142虫卵细胞活力和死亡细胞流式定量检测试剂盒M7453020次
shgoy-143聚乙二醇细胞融合试剂盒M7453110次
Survivin细胞凋亡抑制因子4(抗原)
streptomycin/OVA链霉素偶联鸡卵白蛋白
THY (thyroglobulin,TG)甲状腺球蛋白
Tetracycline/BSA四环素偶联牛血清白蛋白
Thyroxine Binding Globulin甲状腺素结合球蛋白抗原
Tetracycline/OVA四环素偶联鸡卵白蛋白
TRH (Thyrotropin releasing hormone )促甲状腺素释放激素
Thymopentin胸腺五肽
T4-BSA甲状腺素T4偶联牛血清白蛋白
rh-TNF-Alpha(rh-Tumor Necrosis Factor alpha)重组人肿瘤坏死因子
TERT端粒酶逆转录酶
miRNA 尿素 -PAGE 上样液 ,6×10mL包装Tachyplesin I(Tachyplesin-1 precursor )抗菌肽
MT拓普西异构酶Ⅰ抗原
Transferrin转铁蛋白
TPH色氨酸羟化酶(多肽)
UACA葡萄膜自身抗原Uaca
YFV Envelope glycoprotein黄热病毒包膜糖蛋白
2,4-D/BSA2,4-二氯苯氧乙酸偶联牛血清白蛋白
ADH/AVP peptide抗利尿激素/血管升压素抗原(和肽素)
PRRSV M protein猪蓝耳病病毒M蛋白
Newcastle disease virus/HRP鸡新城疫疫苗(鸡瘟4型混合病毒)偶联辣根过氧化物酶
sIgA大鼠分泌型IgA(抗原)
Penicillin G/BSA青霉素G偶联牛血清白蛋白
Penicillin G/OVA青霉素G偶联鸡卵白蛋白
OCT2 (Octamer-binding transcription factor 2)阳离子转运蛋白2抗原
miRNA 尿素 -PAGE 上样液 ,6×10mL包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。