1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-073L-α-氨基-β-羟基丁酸L-ThreonineBR,99%M8173210克
shgoy-074D-α-氨基-β-羟基丁酸D-TheronineBR,99%M817335克
shgoy-075DL-α-氨基-β-羟基丁酸DL-TheronineBR,99%M8173410g
shgoy-076N-叔丁氧羰基-L-苏氨酸BOC-L-ThreonineBR,99%M817355克
shgoy-077N-苄氧羰基-L-苏氨酸CBZ-L-ThreonineBR,99%M8173625克
shgoy-078L-胰化蛋白氨基酸L-TryptophanBR,99%M8173710克
shgoy-079D-胰化蛋白氨基酸D-TrytophanBR,99%M817385克
shgoy-080DL-胰化蛋白氨基酸DL-TrytophanBR,99%M8173910克
shgoy-081N-叔丁氧羰基-L-色氨酸BOC-L-TryptophanBR,99%M8174010克
shgoy-0825-羟基胰化蛋白氨基酸DL-5-HTP特纯,99%M817411克
shgoy-083L-β-对羟基苯基丙氨酸L-TyrosineBR,99%M8174210克
shgoy-084D-β-对羟基苯基丙氨酸D-TyrosineBR,99%M817435克
shgoy-085DL-β-对羟基苯基丙氨酸DL-TyrosineBR,99%M8174410克
shgoy-086二溴酪氨酸3,5-Dibromo-L-TyrosineBR,97%M817451克
shgoy-0873,5-二碘酪氨酸3,5-Diiodo-L-tyrosine dihydrateBR,98%M8174610克
shgoy-088L-酪氨酸二钠盐L-Tyrosine disodium salt昆虫细胞培养级,98%M8174725克
shgoy-089L-α-氨基异戊酸L-ValineBR,99%M8174810克
shgoy-090D-2-氨基-3-甲基戊酸D-ValineBR,99%M817495克
shgoy-091DL-α-氨基异戊酸DL-ValineBR,99%M8175025克
shgoy-092芴甲氧羰基-L-缬氨酸Fmoc-L-valineBR,99%M8175125克
RAB6BRAS癌基因相关蛋白RAB6B抗体
RABGAP1Rab蛋白GTP酶激活蛋白1抗体
RELM beta结肠癌相关基因蛋白抗体(resistin-like β)
phospho-Ron(Tyr1238)磷酸化原癌基因c-Met相关酪氨酸激酶抗体
RNF6环指蛋白6抗体
Ribonuclease 6核糖核酸酶6抗体
Phospho-RASGRF1 (Ser929)磷酸化Ras特异性鸟嘌呤核苷酸释放因子1
phospho-RAD9(Ser380)磷酸化细胞周期检查控制蛋白质抗体
phospho-RAD9(Ser387)磷酸化细胞周期检查控制蛋白质抗体
phospho-RAD9(Tyr28)磷酸化细胞周期检查控制蛋白质抗体
phospho-c-Raf(Ser301)磷酸化原癌基因c-Raf抗体
phospho-c-Raf(Ser494)磷酸化原癌基因c-Raf抗体
phospho-c-Raf(Ser43)磷酸化原癌基因c-Raf抗体
phospho-c-Raf(Ser471)磷酸化原癌基因c-Raf抗体
p分子杂交炉1台包装hospho-c-Raf(Tyr341)磷酸化原癌基因c-Raf抗体
phospho-c-Raf(Thr269)磷酸化原癌基因c-Raf抗体
phospho-c-Raf(Ser339)磷酸化原癌基因c-Raf抗体
Phospho-Rb (Ser612)磷酸化视网膜母细胞瘤相关蛋白1抗体
Phospho-P105 RB (Ser788)磷酸化视网膜母细胞瘤相关蛋白1抗体
phospho-RPS6KB1(Ser417)磷酸化核糖体S6蛋白激酶抗体
phospho-RPS6KB1(Ser427)磷酸化核糖体S6蛋白激酶抗体
Phospho-Rb (Ser795)磷酸化视网膜母细胞瘤相关蛋白1抗体
Phospho-Rb (Thr826)磷酸化视网膜母细胞瘤相关蛋白1抗体
分子杂交炉1台包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。