1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-2943沙氏2%纯度葡萄糖琼脂培养基o-Vanillin
shgoy-2944酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂m-Phenylenediamine
shgoy-2945伊红美兰琼脂N-Phenylurea
shgoy-2946胆盐乳糖培养基Potassium benzoate
shgoy-2947麦康凯琼脂(不含盐)Potassium pyruvate
shgoy-2948麦康凯琼脂培养基Sodium 1-propanesulfonate monohydrate
shgoy-2949麦康凯琼脂3号Sodium 1-propanesulfonate
shgoy-2950山梨醇麦康凯琼脂基础(-)-α-Pinene
shgoy-29514-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基(配套靛基质)β-Pinen
shgoy-2952三糖铁琼脂培养基Seleno-DL-methionine
shgoy-2953四硫磺酸钠亮绿增菌液Semicarbazide
shgoy-2954沙门氏志贺氏属琼脂培养基Sodium benzenesulfonate
shgoy-2955沙门氏志贺氏菌增菌液Sodium decanoate
shgoy-2956溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基Sodium hydrogen phthalate
shgoy-2957绿脓菌素测定用培养基Sodium oxamate
shgoy-2958亚碲酸盐肉汤基础Sodium D-pantothenate
shgoy-2959产毒培养基Sodium periodate
shgoy-2960肠毒素产毒培养基Sodium phenylpyruvate
shgoy-2961葡萄球菌增菌肉汤Sodium phosphite dibasic pentahydrate
shgoy-2962葡萄球菌选择性琼脂Sodium phosphomolybdate hydrate
shgoy-2963北沙参亚碲酸钠胨水培养基基础Strontium acetate
4-Oct胚胎干细胞关键蛋白抗体
OPG骨保护蛋白/护骨素抗体
2-Oct阳离子转运蛋白2抗体
osteopontin骨桥蛋白/分泌型磷蛋白1抗体
osteopontin骨桥蛋白抗体(分泌型磷蛋白1)
Orexin-A增食欲素A/欲激素A
Osterix成骨相关转录因子抗体
Ovalbumin鸡卵白蛋白/卵清蛋白抗体
Orexin receptor 1+2丘脑分泌素受体1+2/食欲素受体1+2抗体
1-Oct阳离子转运器1抗体
DMSO,PCR 级1.5mL包装ox-LDL氧化低密度脂蛋白抗体
Osteocalcin骨钙蛋白/骨钙素抗体
Optineurin视神经病变诱导蛋白抗体
2-Oct胚胎干细胞关键蛋白2抗体
1-Oct胚胎干细胞关键蛋白1抗体
OPRS1衰老相关Sigma受体蛋白抗体
OST-beta有机溶质转运蛋白OSTβ抗体
Noelin嗅球蛋白1抗体
OA1眼部白化病相关蛋白OA1/蛋白偶联受体143抗体
Oncostatin M癌基因蛋白抑瘤素M抗体
OVCA2卵巢癌相关基因2蛋白抗体
Orai2跨膜蛋白Orai2抗体
OTOA耳聋、常染色体隐性遗传22抗体
C1orf801号染色体开放阅读框80抗体
OAS1寡腺苷酸合成酶-1
KLHDC9KLHDC9蛋白抗体
OLIG3少突胶质细胞转录因子3抗体
OTP螺旋转录因子OTP抗体
DMSO,PCR 级1.5mL包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。