1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-455大鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA Kit,48T/96TTPO-Ab ELISA Kit 大鼠抗甲状腺过氧化物酶抗体
shgoy-456山羊肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA Kit,48T/96T IL-28(human Interleukin 28) ELISA Kit 人白介素28
shgoy-457豚鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA Kit,48T/96T IL-29(human Interleukin 29) ELISA Kit 人白介素29
shgoy-458人肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA Kit,48T/96T CD30(Mouse Cluster of differentiation 30) ELISA Kit 小鼠CD30分子
shgoy-459小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA Kit,48T/96T IL-23(Human Interleukin 23) ELISA Kit 人白介素23
shgoy-460猴肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA Kit,48T/96T AIF ELISA Kit 大鼠凋亡诱导因子
shgoy-461猪肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA Kit,48T/96T dsDNA ELISA Kit 大鼠抗双链DNA抗体/天然DNA抗体
shgoy-462大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA Kit,48T/96T MHC- II /H-2 II (Mouse major histocompatibility complex- II ) ELISA Kit 小鼠主要组织相容性复合体Ⅱ类
shgoy-463兔子肿瘤坏死因子α(TNF-α) ELISA Kit,48T/96T MIF(Human Macrophage Migration Inhibitory Factor) ELISA Kit 人巨噬细胞移动抑制因子
shgoy-464人肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA Kit,48T/96T TFPIHuman Tissue factor pathway inhibitor ELISA Kit 人组织因子途径抑制物
shgoy-465小鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA Kit,48T/96T sEPCR(Mouse soluble endothelial protein C receptor) ELISA Kit 小鼠可溶性血管内皮细胞蛋白C受体
shgoy-466大鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA Kit,48T/96T ALP ELISA Kit 大鼠碱性磷酸酶
shgoy-467人血小板生成素(TPO)ELISA Kit,48T/96T ADAMTS13/vWF-cp ELISA Kit 大鼠血管性血友病因子裂解蛋白酶
shgoy-468小鼠血小板生成素(TPO)ELISA Kit,48T/96T MECF(ouse eosinophil chemotactic factor) ELISA Kit 小鼠嗜酸粒细胞趋化因子
shgoy-469大鼠血小板生成素(TPO)ELISA Kit,48T/96T IP-10/CXCL10(Human interferon-inducible protein 10) ELISA Kit 人干扰素诱导蛋白10
shgoy-470人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)ELISA Kit,48T/96TIL-1(Human Interleukin 1) ELISA Kit 人白介素1
shgoy-471小鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)ANG-4 ELISA Kit 大鼠血管生成素4
shgoy-472大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)Eotaxin 1/CCL11(Mouse Eotaxin 1) ELISA Kit 小鼠嗜酸粒细胞趋化蛋白
shgoy-473鸡肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3)ELISA Kit,48T/96TIL-17(Human Interleukin 17) ELISA Kit 人白介素17
shgoy-474人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3)ELISA Kit,48T/96TE-Selectin/CD62E(Mouse E-Selectin) ELISA kit 小鼠E选择素
EDTA-MgNa2间苯二甲酸
EDTA-MgNa2对苯二甲酸
EDTA-2Na对羟基苯丙酮酸
EDTA-2NaCa2-丁酮酸
Ethylenediaminetetraacetic acid manganese disodium salt hydrate苦酮酸
Disodium zinc ethylenediaminetetraacetate tetrahydrate庚二酸
Ethylenediaminetetraacetic acid copper(II) disodium salt反丁烯二酸
EDTA tetrasodium salt戊二酸
EDTA-2K丁二酸
EDTA-3K丁二酸钠六水合物
Canavanine,sulfate(iNOS 抑制剂 )100mg包装Lipoteichoic acid丁二酸钠
Palmitic acid丁二酸铵
Citric acid己二酸
Citric acid壬二酸
α-Ketoglutaric acid内消旋-2,3-二溴丁二酸
α-Ketoglutaric acid disodium salt丙二酸
OPD丙二酸钠一水物
OPD-HC1丙二酸钠
IAM丙酸钠
Putrescine dihydrochloride癸二酸
Formamide辛二酸
Formamide Deionized曲酸
DMFA没食子酸一水物
Spermine没食子酸甲酯
Spermine tetrahydrochloride没食子酸正丙酯
Spermidine乙酸铵
Spermidine trihydrochloride羟基乙酸
CDC羟基乙酸钠
DCCI5-羟基吲哚乙酸
Canavanine,sulfate(iNOS 抑制剂 )100mg包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并大限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。