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人高迁移率族蛋白1(HMG-1)elisa试剂盒使用说明书

阅读次数:407    资料下载    发布时间:2019/4/19 13:30:32

 人高迁移率族蛋白1(HMG-1)elisa试剂盒使用说明书
Elisa kit规格:48孔配置/96孔配置
标准品稀释液:1.5ml×1瓶
酶标试剂:3 ml×1瓶(48)/6 ml×1瓶(96)
【人高迁移率族蛋白1(HMG-1) elisa试剂盒】本试剂仅供研究使用 
计算:
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
试剂盒组成:
封板膜:2片(48)/2片(96)
说明书:1份
密封袋:1个
标准品:   2700ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶  2-8℃保存
酶标包被板:  1×48     1×96         2-8℃保存
样品稀释液: 3ml×1瓶  6 ml×1瓶     2-8℃保存
显色剂A液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶     2-8℃保存
显色剂B液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶     2-8℃保存
终止液:     3ml×1瓶 6ml×1瓶     2-8℃保存
浓缩洗涤液:(20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶   2-8℃保存
实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人高迁移率族蛋白1(HMG-1) 水平。用纯化的人高迁移率族蛋白1(HMG-1) 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入高迁移率族蛋白1(HMG-1) ,再与HRP标记的高迁移率族蛋白1(HMG-1) 抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的高迁移率族蛋白1(HMG-1) 呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人高迁移率族蛋白1(HMG-1) 浓度。
目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中高迁移率族蛋白1(HMG-1) 的含量。
保存条件及有效期:
试剂盒保存:2-8℃| 有效期:6个月 
【人高迁移率族蛋白1(HMG-1) elisa试剂盒】样本处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在*、第二孔中分别加标准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为1800ng/L,1200ng/L ,600ng/L,300ng/L, 150ng/L)。
加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
温育:操作同3。
洗涤:操作同5。
显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 
终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
【人高迁移率族蛋白1(HMG-1) elisa试剂盒】注意事项:
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间zui好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
请每次测定的同时做标准曲线,zui好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。
封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
底物请避光保存。
严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
试剂盒性能:
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
检测范围:
0.2IU/L - 6IU/L 
 
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