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人B族链球菌抗体(Strep-B Ab) 酶联免疫分析 试剂盒使用方法

阅读次数:63    资料下载    发布时间:2019/8/16 16:03:22

 人B族链球菌抗体(Strep-B Ab) 酶联免疫分析 试剂盒使用说明书
 本试剂盒仅供研究使用。 
 96T
使用目的:
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中 B 族链球菌抗体(Strep-B Ab) 表
达。
实验原理
本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人 B 族链球菌抗体(Strep-B Ab) 表达。用纯化的
抗原包被微孔板,制成固相抗原,可与样品中 B 族链球菌抗体(Strep-B Ab) 相结合,经
洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与 HRP 标记的抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原
复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸
的作用下转化成*终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),与 CUTOFF
值相比较,从而判定标本中人 B 族链球菌抗体(Strep-B Ab) 的存在与否。
试剂盒组成 
1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶
2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 阳性对照 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 阴性对照 0.5ml×1 瓶
4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张 
6 显色剂 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个
标本要求 
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1. 编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1
孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)
2. 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50µl。然后在待测样品孔先
加样品稀释液 40µl,然后再加待测样品 10µl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不
触及孔壁,轻轻晃动混匀,
3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。 
4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此
重复 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。 
7. 温育:操作同 3。
8. 洗涤:操作同 5。
9. 显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。
操作程序总结:
计算和结果判定:
 试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10 
 临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15 
 阴性判定:样品 OD 值< 临界值(CUT OFF)者为 B 族链球菌抗体(Strep-B Ab) 阴
 阳性判定:样品 OD 值≥ 临界值(CUT OFF)者为 B 族链球菌抗体(Strep-B Ab) 阳
。 
注意事项
1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。
2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未
用完,板条应装入密封袋中保存。
3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物请避光保存。
6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为 630nm 
7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸,使用时必须
注意安全。
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 个月
 
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