主营产品:细胞/菌种/elisa试剂盒/生化试剂/标准品
上海谷研实业有限公司

021-39596320

全国在线客服

  • 地址:上海松江区新砖公路1290号
  • 手机:15026555973
  • 电话:021-39596320
  • 联系人:刘小姐
  • 网址:www.goybio.com
  • 邮箱:通过本站在线发送邮件给展商
  • 邮编:200000
培养基
常规完全培养基
蛋白/抗体
一抗
生化试剂盒
光合作用系列
维生素系列
糖原系列
糖异生系列
蛋白含量测定系列
其它系列
土壤系列
离子系列
海藻糖系列
蔗糖系列
淀粉系列
脂肪酸代谢系列
蛋白酶系列
糖酵解系列
三羧酸循环系列
氧化磷酸化系列
酯酶系列
氨基酸代谢系列
氮代谢系列
氧化与抗氧化系列
辅酶Ⅰ系列
细胞
原代细胞
细胞系
生物菌种
定量菌株
其它
教学科研
饲料肥料
抗菌防霉
化妆品检测
食品检测
荧光定量PCR试剂盒
荧光定量PCR试剂盒
DNA提取试剂盒
核酸纯化试剂盒
生化检测试剂盒
医学基础代谢指标
脯氨酸代谢途径
苯丙烷代谢途径
脂肪酸系列
呼吸代谢途径系列
细胞壁代谢系列
光合作用系列
碳水化合物代谢系列
氮代谢系列
土壤系列
ASA-GSH循环系列
氧化应激系列
质粒
试剂盒
Human/试剂盒
生化试剂
维生素类
抗生素类
酶类
蛋白质类蛋白质类
碳水化合物类碳水化合物类
氨基酸及衍生物类氨基酸及衍生物类
PCR检测试剂盒
PCR试剂盒
elisa试剂盒
兔进口elisa试剂盒
猪elisa试剂盒
小鼠elisa试剂盒
其它类elisa试剂盒
大鼠elisa试剂盒
人ELISA试剂盒
ATCC\CMCC标准菌株
菌种
标准品
植物标准品
ATCC细胞
Spodopterafruglperda源细胞
蚊子源细胞
鱼源细胞
猴源细胞
牛源细胞
猪源细胞
羊源细胞
兔源细胞
犬源细胞
猫源细胞
豚鼠源细胞
仓鼠源细胞
大鼠源细胞
小鼠源细胞
肿瘤细胞
转化细胞
人正常组织来源细胞
RNA/DNA提取
蛋白质研究
克隆及表达
核酸扩增
探针标记及检测
核酸电泳及回收
DNA纯化产品
RNA纯化
elisa酶联免疫检测试剂盒
豚鼠elisa酶联免疫检测试剂盒
大鼠elisa酶联免疫检测试剂盒
小鼠elisa酶联免疫检测试剂盒

资料下载

真鲷虹彩病毒(RSIV)荧光 PCR 检测试剂盒说明书

阅读次数:302    资料下载    发布时间:2020/6/12 16:08:12

 
 
真鲷虹彩病毒(RSIV)荧光 PCR 检测试剂盒说明书
 
1、试剂盒简介货
真鲷虹彩病毒(RSIV)荧光 PCR 检测试剂盒主要感染当年草鱼种和青鱼,死亡率可达80%以上。其它淡水鲤科鱼,如鲢鱼、鳙鱼、鲫鱼、鲤鱼感染后没有临床症状,但可以携带病毒到处传播。该病在水温高于20℃以上时流行, 25~28℃为流行高峰。常见的临床症状为眼突出、体色发黑,口腔、鳃盖和鳍条基部出血。撕开表皮,可见肌肉出现点状或块状出血。剖检腹腔, 可见肠道充血, 肝、脾充血或因失血而发白。病原为草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV),是水生呼肠孤病毒属(Aquareovirus)的成员。病毒为直径70nm的球形颗粒,有双层衣壳,无囊膜,含有11个片段的双链RNA。根据片段长度大小分为大(L1、L2、L3,大小在4.0kb~3.7kb)、中(M4、M5、M6,大小在2.5~2.0kb)、小(S7、S8、S9、S10、S11, 大小在1.6~1.0kb) 三组。在不同地区存在抗原性、核酸电泳图谱、对细胞的敏感性和对鱼的毒力都有一定差异的毒株。多年研究已经确定的有二个典型的代表株:GCRV-873为湖南株,能在CO、CIK等细胞中大量增殖并出现CPE,症状以内脏出血为主;GCRV-9014为湖北株,能在CIK、CO细胞中大量增殖,但不产生CPE,症状以肌肉出血为主。在核酸序列上GCRV-9014株和GCRV-873株的同源性不到81%。为了适应草鱼出血病(GCRV)快速检测和疫病研究的需要,本公司严格依据SN/T3584-2013草血病检疫技术规范规定的检测GCRV-9014株病毒的引物序列及其循环参数等技术标准,在本公司严谨的产品质量保证体系管控下生产和质检。确保本试剂盒满足标准的检测要求。本试剂盒具有快速灵敏、特异、准确、安全、操作简单、应用广泛等特点及优点。
2、试剂盒组成
 
试剂盒组成包括核酸扩增试剂。具体组成参见表 1:
表 1:试剂盒组成(50test/盒)
试剂盒组成成分体积
核酸提取试剂: 核酸裂解液15ml×2 管
核酸扩增试剂: DEPC 水
GCRV-9014 RT-PCR 反应液
酶混合物阴性对照
GCRV-9014 阳性对照1ml×1 管
750µL×1 管
60µL×1 管
1ml×1 管
1ml×1 管
(注:核酸提取试剂可使用本公司生产的提取核酸更快捷方便的《病毒 RNA 柱式提取试剂盒》)
 
3、样本采集,存放及运输
 
3.1样本采集:所用取样器材必须经高压灭菌并烘干。
 
 
 
取新鲜鱼类组织脏器(肝、脑、脾、肾)2g 于已洗净、灭菌并烘干的研钵中充分研磨,加 5ml PBS 混匀,2 000r/min 离心 10min 取上清转入无菌离心管中备用。或取有可疑细胞病变的细胞悬液用于检测。
3.2存放:研磨后的样本在 2 ℃—8 ℃条件下保存应不超过 24 h;-70 ℃以下可长期保存,但应避免反复冻融(*多冻融 3 次)。
3.3运输:采用冰壶或泡沫箱加冰密封进行运输。
 
4、一步法 RT-PCR 检测
 
4.1操作方法
 
4.1.1样本的处理(在样本制备区进行):
4.1.1.1取 n 个灭菌的 1.5 mL Eppendorf 管,其中 n 为被检样品与阴性对照的和(阳性对照、阴性对照在试剂盒中已标出),做标记。(注:试剂盒中的阳性对照直接作为 PCR 检测的模板,无需提取核酸)
4.1.1.2每管加入 600 L 裂解液,分别加入被检样本和阴性对照各 200 L,一份样本换用一个吸头,再加入 200 L 氯仿,混匀器上振荡混匀 5 s(不能过于强烈,以免产生乳化层,也可以用手颠倒混匀),于 4℃ 12 000 r/min 离心 15 min。
4.1.1.3取与 4.1.1.1 相同数量灭菌的 1.5 mL Eppendorf 管,加入 500 L 异丙醇(-20℃预冷), 做标记。吸取 4.1.1.2 各管中的上清液转移至相应的管中,上清液应至少吸取 500L,不能吸出中间层,颠倒混匀。
4.1.1.4于 4 ℃、12 000 r/min 离心 15 min(Eppendorf 管开口保持朝离心机转轴方向放置),小心倒去上清,倒置于吸水纸上,沾干液体(不同样品须在吸水纸不同地方沾干);加入 600 L 75% 乙醇,颠倒洗涤。
4.1.1.5于 4 ℃、12 000 r/min 离心 10 min(Eppendorf 管开口保持朝离心机转轴方向放置),小心倒去上清,倒置于吸水纸上,尽量沾干液体(不同样品须在吸水纸不同地方沾干)。
4.1.1.64 000 r/min 离心 10s(Eppendorf 管开口保持朝离心机转轴方向放置),将管壁上的残余液体甩到管底部,小心倒去上清,用微量加样器将其吸干,一份样本换用一个吸头,吸头不要碰到有沉淀一面,室温干燥 3 min,不能过于干燥,以免 RNA 不溶。
4.1.1.7加入 11 L DEPC 水,轻轻混匀,溶解管壁上的 RNA,2 000 r/min 离心 5 s,冰上保存备用。提取的 RNA 须在 2 h 内进行 PCR 扩增;若需长期保存须放置-70 ℃冰箱内。
【也可参照《病毒 RNA 柱式提取试剂盒说明书》(货号:HB-QPCR-01)使用,更方便快捷提取核酸】。
注:提取的 RNA 须在 2 h 内进行 PCR 扩增;若需长期保存须放置-70 ℃冰箱内。
 
4.2、试剂准备
 
4.2.1扩增试剂准备(在反应混合物配制区进行):
从试剂盒中取出相应的一步法RT-PCR反应液、RT-PCR混合酶,在室温下融化后,2 000 r/min 离心5 s。设所需一步法RT-PCR检测总数为n,其中n为被检样品、阳性对照与阴性对照的和,每个样品测试反应体系配制见下表2。
表 2 每个样品测试反应体系配制表
试剂RT-PCR 反应液RT-PCR 混合酶
 
 
用量15 μL1.0 μL
根据测试样品的数量计算好各试剂的使用量,加入到适当体积试管中,充分混合均匀,向每个一步法RT-PCR管中各分装15 μL,转移至样本处理区。
4.2.2加样(在样本处理区进行):
在各设定的一步法RT-PCR管中分别加入上述样本处理步骤4.1.1.7中制备的RNA溶液各10μL,盖紧管盖,500 r/min离心30s。
4.3、检测(在检测区进行):
 
将4.2.2中离心后的PCR管放入PCR检测仪内,记录样本摆放顺序。循环条件设置如下: 阶段:42 oC/30 min;
第二阶段:94 oC/4 min;
第三阶段:94 oC/1 min, 55 oC/1 min,72 oC/1 min, 30个循环; 第四阶段,72 oC/8 min;
第五阶段,4 oC 保存。
4.4、琼脂糖电泳
 
用电泳缓冲液制备1.5%的琼脂糖凝胶平板。将平板放入水平电泳槽,使电泳缓冲液刚好淹没胶面。将10μL样品PCR扩增产物和相应电泳上样缓冲液(Loading Buffer)按比例混匀后加入样品孔。在电泳时设立DNA标准分子量作对照。5 V/cm电泳约0.5 h,当溴酚蓝到达底部时停止。在紫外灯下或凝胶成像仪的紫外透射光下观察是否扩增初预期的特异性DNA电泳带,拍摄并记录。
5、结果判定
 
5.1一步法RT-PCR后阳性对照出现一条320bp的DNA片段。阴性对照和空白对照没有该核酸带。
5.2待测样品在相应 320 bp DNA 位置上有带,可判阳性。
 
6、相关技术信息
 
F: 5’-acgtg cgatt ggaag agctt- 3’ R: 5’-agttc tcaaa gctga gacag- 3’
 
公司首页| 公司简介| 产品展示| 公司新闻| 技术文献| 资料下载| 采购咨询| 联系我们| 销售网络

Copyright(C) 2014 上海谷研实业有限公司   All rights reserved   技术支持:阿仪网   管理登录   

地址:上海松江区新砖公路1290号    电话:021-39596320   邮箱:通过本站在线发送邮件给展商   总访问量:3553472

8

阿仪网推荐收藏该企业网站