鲸孕激素/孕酮(PROG)ELISA检测试剂盒说明书
产品名称: 鲸孕激素/孕酮(PROG)ELISA检测试剂盒
规格:96T/48T
保存;2-8℃。
检测目的:用于检测血浆,血清及相关液体等样本。例如灌洗液、脑脊液、血清、血浆、尿液、胸腹水、细胞培养上清、组织匀浆等标本.
检测种属:大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、裸鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、马铃薯、鹿、羊、鸡、鸭、鱼、人、等动植物。
试剂盒组成及试剂配制 :
1.酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。
2. 标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3. 样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶
4. 生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6. 生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7. 辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9. 浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10. 终止液(S Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
样品收集、处理及保存方法:
1)血清－－－－-操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2)血浆－－－－-EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3)细胞上清液－－-1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4)组织匀浆－－－－-将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液
5)保存－－－－－－如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或血。如果血清中大量颗粒,检测先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
操作步骤:
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl(样品终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 后弃去,如此重复 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同 3。
8. 洗涤:操作同 5。
9. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15 分钟.
10. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。
使用注意事项:
1. 试剂盒使用请保存在2-8℃。复溶后的标准品若未用完,请废弃。
2. 微量试剂运输中颠簸和可能的倒置,会使液体沾到管壁或瓶盖。因此使用请1000转/分离心1分钟,以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。
3. 从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象,微加热至40℃使结晶完全溶解后再配制洗涤液。
(加热温度不要超过50℃)使用时洗涤液应为室温。
4. 不同批号的试剂盒组份避免混用(洗涤液和反应终止液除外)。
5. 充分轻微混匀对反应结果尤为重要,zui好使用微量振荡器(使用zui低频率),如无微量振荡器,可在反应孵育手工轻轻混匀。
6. 在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测。
7. 试验中所用的试管和吸头均为一次性使用,严禁在不同的液体之间混用!否则将影响试验结果。
8. 试验中请穿着试验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液标本时,请按国家生物试验室安全防护条列执行。
本公司产品仅用于科研。
