商品属性: 产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
羟脯氨酸(HYP)可见分光光度法检测试剂盒 | 可见分光光度法 | 50管/48样 | GOY-01S6536 |
商品介绍:测定意义:
HYP是机体胶原蛋白主要成分,胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等,因此HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。
测定原理
样品经酸水解产生游离的HYP,进一步被氯胺T氧化,氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应,产生红色化合物,在560nm处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm吸光
值,可计算HYP含量。
自备实验用品及仪器
天平、烘箱、玻璃管、离心机、水浴锅、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、6mol/L盐酸和蒸馏水。
需自备的仪器和用品:可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水
提取液:液体×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体×1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。临用加入2.6mL试剂一,充分震荡溶解。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存。临用加入2.6mL试剂一,充分震荡溶解。
操作步骤:一、粗酶液提取:
1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心10min,取上清液待测。
2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3,间隔7,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
3.血清等液体:直接测定。
二、测定操作:
1.分光光度计预热30 min,调节波长到412 nm,蒸馏水调零。
2.试剂二置于37℃水浴中预热30min。
3.空白管:取1mL玻璃比色皿,依次加入100μL蒸馏水、800 μL试剂一、50μL试剂二和50 μL试剂三,迅速混匀,于412nm处测定3min内吸光值变化,第10s吸光值记为A1,第190s吸光值记为A2。△A空白管=A2-A1
4.测定管:取1mL玻璃比色皿,依次加入100μL上清液、800 μL试剂一、50μL试剂二和50 μL试剂三,,迅速混匀,于412nm处测定3min内吸光值变化,第10s吸光值记为A3,第190s吸光值记为A4。△A测定管=A4-A3 。
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更新时间:2024/1/4 13:23:41
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