1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2m,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟,弃上清。
10.室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大约晾5-10分钟即可.不要真空离心干燥,过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5℅SDS,用枪头吸打几次,55-60℃放置10分钟使RNA溶解.如RNA用于酶切反应,勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去离子甲酰胺溶解,-70℃保存。
shgoy-6547体液半胱氨酸(cysteine)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒M8093520次
shgoy-6548植物半胱氨酸(cysteine)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒M8093620次
shgoy-6549通用型胱氨酸(cystine)含量比色法定量检测试剂盒M8093720次
shgoy-6550细胞胱氨酸(cystine)含量比色法定量检测试剂盒M8093820次
shgoy-6551组织胱氨酸(cystine)含量比色法定量检测试剂盒M8093920次
shgoy-6552血液胱氨酸(cystine)含量比色法定量检测试剂盒M8094020次
shgoy-6553体液胱氨酸(cystine)含量比色法定量检测试剂盒M8094120次
shgoy-6554植物胱氨酸(cystine)含量比色法定量检测试剂盒M8094220次
shgoy-6555通用型胱氨酸(cystine)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒M8094320次
shgoy-6556细胞胱氨酸(cystine)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒M8094420次
shgoy-6557组织胱氨酸(cystine)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒M8094520次
shgoy-6558血液胱氨酸(cystine)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒M8094620次
shgoy-6559体液胱氨酸(cystine)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒M8094720次
shgoy-6560植物胱氨酸(cystine)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒M8094820次
shgoy-6561通用型亮氨酸(leucine)含量比色法定量检测试剂盒M8094920次
shgoy-6562细胞亮氨酸(leucine)含量比色法定量检测试剂盒M8095020次
shgoy-6563组织亮氨酸(leucine)含量比色法定量检测试剂盒M8095120次
shgoy-6564血液亮氨酸(leucine)含量比色法定量检测试剂盒M8095220次
shgoy-6565体液亮氨酸(leucine)含量比色法定量检测试剂盒M8095320次
shgoy-6566植物亮氨酸(leucine)含量比色法定量检测试剂盒M8095420次
shgoy-6567通用型亮氨酸(leucine)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒M8095520次
shgoy-6568细胞亮氨酸(leucine)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒M8095620次
shgoy-6569组织亮氨酸(leucine)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒M8095720次
Homo sapiens (Human)可溶性半乳糖苷结合凝集素16(LGALS16)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)内切核酸酶V(ENDOV)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)Kazrin蛋白(KAZN)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)前庭蛋白1(VEST1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)杀伤蛋白(KLLN)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)胰蛋白酶X3(TRYX3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)Whirlin蛋白(WHRN)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)皮卡丘素(Pikachurin)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
大提柱式动物 RNAout5次包装Homo sapiens (Human)血色病蛋白(HFE)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)微脑磷脂1(MCPH1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)肾病型胱胺酸症蛋白(CTNS)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)脑蛋白44(BRP44)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)Hairless蛋白(HR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)载脂蛋白L6(APOL6)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)Atonal同源物1(ATOH1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)钙黏蛋白12(CDH12)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)矢车菊苷γ3(CENTγ3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)矢车菊苷δ3(CENTδ3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)矢车菊苷δ2(CENTδ2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)矢车菊苷δ1(CENTδ1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)羧肽酶X1(CPX1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)二羟基激酶2(DAK)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)加帽酶2(DCP2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)防御素β118(DEFβ118)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)Derlin 1蛋白(DERL1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)Derlin 2蛋白(DERL2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)Derlin 3蛋白(DERL3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
Homo sapiens (Human)白喉素合酶(DPH5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)
大提柱式动物 RNAout5次包装技术优势
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。